Detección de citomegalovirus mediante PCR dúplex en tiempo real

Tema: Detección de citomegalovirus en plasma de pacientes con VIH  mediante PCR dúplex en tiempo real

Objetivo: Detectar y cuantificar el CMV mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR) dúplex en tiempo real, a partir de una mínima cantidad de plasma.

Muestra: Plasma de pacientes con infección por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH)

Tipo de Ácido Nucleico: ADN viral

Extracción:

Lisis: Uso de enzimas

Separación: electroforesis en un gel de agarosa al 2% con un marcador de DNA de 100 pb

Purificación: Uso del Kit QIAamp UltraSens Virus 

Gen a amplificar: genes UL122 y UL83 se amplificaron con diferentes fluoróforos mediante PCR dúplex en tiempo real.

Tipo de PCR: Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) dúplex en tiempo real

Pasos:

Desnaturalización: 95 °C por 15 minutos

Hibridación: 57 °C por 90 segundos

Elongación: 72 °C por 10 minutos

Visualización: de los plasmas de pacientes con infección por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) con una carga viral ≥ 100,000 copias/ml, el 11.36% fueron verdaderos positivos para CMV y el 88.64% no tuvieron amplificaciones o estuvieron fuera del rango lineal de detección molecular.

Obtenido de: https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=457767703013

Referencia:

1. Valdez-Salazar H. A, Sánchez-Nájera N, Ribas-Aparicio R. M, Pompa-Mera E. N, Mata-Marín J. A, Gómez-Delgado A, Aguilera P, , Ruiz-Tachiquín M. E.  Detección de citomegalovirus en plasma de pacientes con VIH mediante PCR dúplex en tiempo real. Revista Médica del Instituto Mexicano del Seguro Social [Internet]. 2020;58(2):154-160. Recuperado de: https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=457767703013